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　　問題一、為什么藍耳病在許多場，經(jīng)常是免疫或不免疫都有發(fā)病很嚴重，帶來很大損失?

　　我想不光是藍耳病，在我國豬病都有一個共性問題，就是診斷的問題。很多豬場發(fā)病在臨床現(xiàn)場一看就診斷，或實驗室一檢出藍耳病毒就診斷為藍耳病了。這里要強調的是：藍耳病毒的檢出 ≠ 藍耳病的存在。

　　病是一個因病原造成臨床影響的過程，而病原可以是潛伏在體內，呈持續(xù)帶毒狀態(tài)，未見得一定有臨床問題。

　　另一方面，藍耳病現(xiàn)在大部分用活疫苗免疫防控，疫苗毒在一定的時間內都是可檢出的，所以檢出的病毒如果不做鑒別檢驗，可能會造成臨床上的誤診。

　　問題二、臨床上很多豬群檢出藍耳病毒已經(jīng)是常態(tài)，那么如何判斷這個豬場因為藍耳病毒的存在造成了疫情呢?

　　第一，在最近沒有免疫的情況下，使用雙份血清的評價方式。

　　即豬場一直在持續(xù)監(jiān)測的狀態(tài)下，當感到臨床不穩(wěn)定時采血檢測，和原來監(jiān)測時的檢測結果對比。

　　如果不穩(wěn)定時血清PRRSV抗體值突然升高，一下子有較大的變化，可以考慮是藍耳病毒帶來的影響。

　　第二，在一個場疫情的早期，對早期有代表性的發(fā)病豬及時剖檢、采樣送實驗室進行檢測診斷。

　　如果不是在疫情早期采樣，或者已經(jīng)采用了各種方法治療一段時間后再去做檢測，可能得出的診斷結論就會是多種病原混合感染，而不是這次疫情的病原。可能現(xiàn)實中多數(shù)情況是，這個發(fā)病群等到檢測結果出來了再去采取措施控制已經(jīng)來不及了。

　　其實可以在發(fā)病初期在采樣檢測同時根據(jù)臨床判斷采取控制措施。這樣等診斷結果出來了，就算之前的判斷錯誤，也可以證實本次發(fā)病的原因是什么，對今后的疫情防控也是有指導意義的。

　　問題三、藍耳病檢測采樣的靶組織和靶器官應該是哪些呢?

　　對藍耳病來說血樣是很好的靶樣品，另外我們應該對發(fā)病過程中臨床上有代表性的豬只進行剖檢，采取病毒檢出率高的靶組織(藍耳病毒除了血液，扁桃體和肺是最重要的靶器官外，在肺門淋巴結和下頜淋巴結也可以檢出)。

　　作為藍耳病毒，其最重要的靶組織就是扁桃體和肺臟，血液作為最容易采集的樣品，在藍耳病的檢出中意義也是非常大的。

　　血液中病毒檢出時間較早，一般感染后3天左右就能從血液中檢出，同時持續(xù)的時間也非常長，可以達到2-3個月，所以作為活體檢測，血是最好的。作為死亡剖檢動物來說，扁桃體和肺臟是最重要的靶器官。

　　問題四、關于藍耳病如何做鑒別診斷，耳朵發(fā)藍就一定是藍耳病嗎?在實驗室檢測上如何區(qū)分高藍和經(jīng)典毒株?

　　并不是耳朵發(fā)藍一定是藍耳病，末梢循環(huán)障礙時耳朵都會發(fā)藍。

　　藍耳病有一個典型的癥狀，就是眼結膜炎，開始可能是漿液性的，后面可能會發(fā)展成粘液性的。

　　高致病性藍耳病時20-40%的豬有神經(jīng)癥狀，因為藍耳病毒在后期會進入到腦組織中，造成一些神經(jīng)癥狀，可以看到運動障礙、抽搐、后軀麻痹等。扁桃體出血、潰瘍，肺組織實變。

　　在敗血癥時可看到脾臟腫大淤血、梗死灶，但是這種腫大與豬瘟以及一些細菌性疾病時我們看到的脾腫是有區(qū)別的，除非后續(xù)繼發(fā)細菌感染，單一病毒造成的損傷是不太容易看到那種脾臟極度腫大的。

　　臨床上近年來在PRRSV鑒別檢驗這塊要做的工作很多。我們檢測藍耳病毒所用的PCR方法可能是各種各樣的，有些可能直奔高致病藍耳病毒的檢測去了，有些可能檢測的是經(jīng)典藍耳。

　　事實上，在所有的病原檢測方法里，沒有所謂針對經(jīng)典藍耳病毒的，只有藍耳病毒通用的RT-PCR。因為藍耳病毒通用檢測方法是針對藍耳病毒最保守的片段設計的引物，而引物不同靈敏度也不同，作為藍耳病毒的檢測方法來說，使用最保守片段引物是最靈敏的，我們用的通檢RT-PCR就是這樣的方法。

　　比如使用通檢的RT-PCR方法檢出十個樣品里面有八個陽性，而用檢變異株RT-PCR方法(引物)，十個里面檢出六個原來陽性較強的樣品。

　　不是說漏掉的那兩個弱陽性就是經(jīng)典株，是因為兩種方法的靈敏度不同造成那兩個弱陽性樣本就沒有被檢出，假如送去測序它們有可能都是變異株。所以說使用通檢RT-PCR方法只能告訴你檢出來是藍耳病毒陽性，而不能確定是哪個毒株。

　　而接下來再用檢變異株的RT-PCR方法檢顯示一部分陽性一部分陰性，是因為后一種方法靈敏度比通檢的方法低，原來強陽性的現(xiàn)在檢出是陽，弱陽性的檢出就是陰了，而不能說那一部分變?yōu)殛幮缘木褪墙?jīng)典株。

　　有些場檢出藍耳既有高致病的也有經(jīng)典的，有可能是因為檢測方法靈敏度不同造成的對檢測結果的理解誤區(qū)。在通檢陽性的結果下，需要再做鑒別檢驗才能告訴你這個毒株是什么類型。

　　問題五、藍耳病與臨床癥狀相似的疾病如何做鑒別診斷?

　　對臨床癥狀相似或相同的病做鑒別診斷，這點非常重要。有些場在臨床診斷上，把其他疾病引發(fā)的癥狀歸結到藍耳病上。比如2012年在偽狂犬流行毒株造成的豬偽狂犬爆發(fā)場，發(fā)病豬肉眼看到與高致病性藍耳病相似的肺實變，但是做成組織切片就發(fā)現(xiàn)，情況大相徑庭。

　　病豬肺臟在組織學上看到的是壞死灶，這是偽狂犬的典型病變，因為偽狂犬病就是以灶性壞死為組織學特點。但是藍耳病毒主要在肺泡2型細胞和巨噬細胞增殖，肺組織除了間質性肺炎沒有其他變化。

　　之后在肺免疫組化染色中檢出的是偽狂犬病毒而沒有藍耳病毒。這些臨床表現(xiàn)相似的疾病在組織學中可以清晰的做區(qū)分。

　　問題六、現(xiàn)在在藍耳病毒的檢測中還需要區(qū)別野毒和疫苗毒，那么豬場如何去區(qū)分是野毒感染還是疫苗毒，以及如何評價打苗以后的結果?怎么去做檢測?

　　實際上藍耳病毒的抗體檢測方法有很多，但是對現(xiàn)在大規(guī)模樣品檢測來說，ELISA是一個相對方便能夠在臨床上推廣應用的方法。ELISA方法有很多商品化試劑盒，在國內用的最多的是兩類。一類是N蛋白包被的試劑盒，一類是糖蛋白包被的試劑盒。

　　那么這兩類試劑盒的蛋白包被是一個什么關系呢?

　　與病毒免疫原性相關性更好的是膜上的糖蛋白，而病毒感染首先激發(fā)的是跟核酸相關的N蛋白。

　　那么在臨床下什么情況下該選什么蛋白包被的試劑盒呢?

　　N蛋白激發(fā)抗體產(chǎn)生時間很早，如果是一個沒有感染過藍耳病的地區(qū)或場，一定是用N蛋白來做防控預警。還有就是做雙份抗體的檢測，一旦出現(xiàn)N蛋白抗體在沒有免疫的情況下出現(xiàn)一個跳升，一定和藍耳病毒感染發(fā)病相關性很大。

　　而作為疫苗的免疫效果的，則與糖蛋白相關性大，N蛋白產(chǎn)生的抗體只代表是不是有感染，與中和抗體及攻毒保護結果相關性不大。N蛋白抗體出現(xiàn)早，但是持續(xù)時間相對短，且與免疫保護相關性較小。糖蛋白抗體產(chǎn)生時間晚，且持續(xù)時間長，與免疫保護相關性更好，所以通常用它來做免疫后抗體水平監(jiān)測，監(jiān)測豬群是否處在保護狀態(tài)。

　　PRRSV主要蛋白的作用

　　注：使用上述不同蛋白作為包被抗原的ELISA試劑盒，在臨床上可用于不同免疫和感染背景的豬群。